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亲和层析影响因素

亲和层析影响因素

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  • 发布时间:2022-07-13 11:35
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【概要描述】  亲和层析是一种色谱方法,利用固定相的结合特性来分离分子。亲和层析在凝胶过滤色谱柱上连接与待分离物质有一定结合能力的分子,它们的结合是可逆的,当流动相条件改变时,可以相互分离。亲和层析可用于从混合物中纯化或浓缩分子,或者去除或减少混合物中分子的含量。

亲和层析影响因素

【概要描述】  亲和层析是一种色谱方法,利用固定相的结合特性来分离分子。亲和层析在凝胶过滤色谱柱上连接与待分离物质有一定结合能力的分子,它们的结合是可逆的,当流动相条件改变时,可以相互分离。亲和层析可用于从混合物中纯化或浓缩分子,或者去除或减少混合物中分子的含量。

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  亲和层析是一种色谱方法,利用固定相的结合特性来分离分子。亲和层析在凝胶过滤色谱柱上连接与待分离物质有一定结合能力的分子,它们的结合是可逆的,当流动相条件改变时,可以相互分离。亲和层析可用于从混合物中纯化或浓缩分子,或者去除或减少混合物中分子的含量。

  特殊应用

  亲和层析用途广泛,可用于从细胞提取物中分离和纯化核酸和蛋白质,也可用于从血浆中分离抗体。亲和层析常用于分离的蛋白质。通过基因修饰,给蛋白质添加一些人工特性,使蛋白质选择性地与配体结合,从而达到分离的目的。亲和层析的另一大用途是从血浆中分离抗体。

  影响因素

  1.上样体积

  如果目标产物与配体的结合作用很强,上样量对亲和层析效应影响不大。如果之间的结合力较弱,则样品浓度应较高,上样量不应超过柱负荷的5%~10%。(该负载是指色谱柱吸附的配体的量)

  2.柱长

  亲和柱的长度需要根据亲和介质的性质来确定。如果亲和介质的负载量高,并且其与目标产物(目标)的相互作用强,则可以选择较短的珠子(柱);相反,应该增加柱的长度,以确保目标产物与亲和介质有足够的相互作用时间。

  3.流速

  在亲和吸附过程中,目标产物和配体之间达到结合反应平衡需要一个缓慢的过程。因此,样品在柱上的流速应尽可能的慢,以保证目标产物有足够的时间与配体结合,尤其是当它们之间的结合力较弱,样品浓度过高时。

  4.温度

  温度效应在亲和层析中很重要,亲和介质的吸附能力受温度影响,因此可以采用不同的温度进行吸附和洗脱。一般亲和介质的吸附能力随着温度的升高而降低,因此上样时可以选择较低的温度,使待分离的物质与配体有更大的亲和力,充分结合;然而,当洗脱时间较高时,待分离物质与配体之间的亲和力降低,这便于待分离物质从配体上脱落。例如,一般吸附在4℃进行,解吸在25℃进行。


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